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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人神經(jīng)星形膠質(zhì)分離自腦組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，是哺乳動(dòng)物腦內(nèi)分布廣泛的一類細(xì)胞，也是膠質(zhì)細(xì)胞中體積大的一種。用經(jīng)典的金屬浸鍍技術(shù)（銀染色）顯示此類膠質(zhì)細(xì)胞呈星形，從胞體發(fā)出許多長(zhǎng)而分支的突起，伸展充填在神經(jīng)細(xì)胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經(jīng)細(xì)胞的作用。細(xì)胞突起的末端常膨大形成腳板或稱終足，有些腳板貼附在鄰近的毛細(xì)血管壁上，因此這些腳板又被稱為血管足或血管周足，靠近腦脊髓表面的腳板則附著在軟膜內(nèi)表面，彼此連接構(gòu)成膠質(zhì)界膜。細(xì)胞剛分離時(shí)呈圓形，24h后大部分細(xì)胞貼壁，均勻分布于瓶底，部分細(xì)胞伸出細(xì)小突起，培養(yǎng)4-5d后細(xì)胞數(shù)量明顯增多，呈扁平、多角形，胞質(zhì)豐富且核漿較少，細(xì)胞核呈橢圓形，偏于胞體一側(cè)。神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要細(xì)胞組成，不僅具有支持功能，還能夠合成及分泌多種神經(jīng)活性物質(zhì)，在維持神經(jīng)元內(nèi)外環(huán)境、生存、遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、軸突生長(zhǎng)及功能整合等方面具有重要作用。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人神經(jīng)星形膠質(zhì)采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人神經(jīng)星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)檢測(cè)試劑盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表面活性蛋白D(SP-D)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF檢測(cè)試劑盒豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CDH1重組小鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine 0.5mgA/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine) A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白

USP46重組人 / 小鼠 USP46 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽) Protein

IL21R Protein Human 重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

EFNB1 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

蛋白激酶Cδ(PKCδ)重組蛋白 Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd)

IL21R Protein Human 重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

DDR1重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

FGFR4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

AHSP重組人 AHSP / ERAF 蛋白 Protein

豚鼠壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human peosidine ELISA Kit (Peosidine) 人戊糖素(Peosidine)檢測(cè)試劑盒

HumanBeta-Endorphieceptor,β-EPRELISAKit 人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCross-linkedCarboxy-terminaltelopeptideoftypeⅠcollagen,ⅠCTP檢測(cè)試劑盒人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織D-葡萄糖激酶法定量檢測(cè)試劑盒20次

HumanProstaglandinE2，PG-E2ELISAKit人前列腺素E2(PGE2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞人總鐵結(jié)合力（TIBC）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人總前列腺特異抗原(tPSA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人總抗氧化能力(T-AOC)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人總蛋白（TP）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。